体外连接的DNA重组分子导入合适的受体细胞才能大量增殖。为了提高受体菌摄取外源DNA的能力，提高转化效率以获得更多的转化子，人们摸索出了不同的方法处理细菌，使其处于感受态。目前主要采用电转化法和CaCl₂法将外源DNA导入受体细胞中，并需要相应地制备电转化感受态细胞和CaCl₂感受态细胞。

实验目的：学习感受态细胞的制备过程

实验材料：大肠杆菌菌株DH5a或DH10B

实验原理：电转化法是利用瞬间高压在细胞上打孔，因而需用冰冷的超纯水多次洗涤处于对数生长前期的细胞，以使细胞悬浮液中应含有尽量少的导电离子。转化效率为109～1010 转化子/µg DNA；对于热激法，是利用冰冷的CaCl2处理对数生长期的细胞，可以诱导其产生短暂的“感受态”，易于摄取外源DNA。转化效率为106 ～10⁷转化子/µg DNA。

CaCl2感受态细胞的制备实验步骤

1． 前夜接种受体菌（DH5a或DH10B），挑取单菌落于LB培养基中37℃摇床培养过夜（约16小时）；

2． 取1ml过夜培养物转接于100ml LB培养基中，在37℃摇床上剧烈振荡培养约2.5-3小时（250-300rpm）；

3． 将0.1M CaCl₂溶液置于冰上预冷；以下步骤需在超净工作台和冰上操作

4． 吸取1.5ml培养好的菌液至1.5ml离心管中，在冰上冷却10分钟；

5． 4℃下3000 g冷冻离心5分钟；

6． 弃去上清，加入100ml预冷0.1M CaCl₂溶液，用移液枪轻轻上下吸动打匀，使细胞重新悬浮，在冰放置20分钟；

7． 4℃下3000 g冷冻离心5分钟；

8． 弃去上清，加入100ml预冷0.1M CaCl₂溶液，用移液枪轻轻上下吸动打匀，使细胞重新悬浮；

9． 细胞悬浮液可立即用于转化实验或添加冷冻保护剂（15% - 20%甘油）后超低温冷冻贮存备用（－70℃）。