一．实验目的 ：

将293FT细胞传代，提供足够的细胞供实验使用

二．实验原理 ：

细胞在培养瓶长成致密单层后，已基本上饱和，为使细胞能继续生长，同时也将细胞数量扩大，就必须进行传代

三．实验材料 ：

293FT细胞，DMEM+10%小牛血清，D-hanks液，胰酶-EDTA液

四．实验步骤：

293FT细胞传代：细胞培养采用DMEM+10%小牛血清，当细胞密度达80-90%的时候可以进行细胞传代，具体步骤如下：

• 弃培养瓶中培养基，直接加入1滴管胰酶-EDTA，室温孵育1min左右，（时间不要太长，否则细胞会消化过度），加入4滴管完全DMEM中和，轻轻吹打细胞瓶，将细胞从瓶底吹下来；
• l将细胞悬液转入10ml的试管中，800rpm，离心3min；
• l弃上清，加入6ml左右D-Hank`s至试管中，轻轻重悬细胞；
• l800rpm，离心3min；
•  弃上清，加入6ml左右D-Hank`s至试管中，轻轻重悬细胞；
•  800rpm，离心3min；
• l弃上清，加入4ml完全DMEM重悬细胞后记数；

五．注意:

1.无菌操作

2.胰酶消化时间控制好，不宜过长